ABSTRACT
@#[摘 要] 目的：探究甲基转移酶样蛋白3（METTL3）修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/膜联蛋白A2/ Wnt/β-连环蛋白（BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin）轴调控结直肠癌细胞SW480恶性生物学行为的分子机制。方法：选取2022年6月至2022年11月间在复旦大学附属中山医院厦门医院手术治疗的24例CRC患者，收集患者的CRC组织和对应的癌旁组织，用qPCR法检测其中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β mRNA的表达，用Pearson法分析CRC组织中RNASEH1-AS1表达分别与METTL3和BUD13表达的相关性。常规培养结直肠癌细胞SW480，分为sh-NC组、sh-RNASEH1-AS1组、NC组、sh-METTL组、si-NC组、si-BUD13组、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC组、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2组、sh-METTL+pc-NC组、sh-METTL+pc-ASEH1-AS1组，用Lipofectamine® 2000转染试剂将sh-NC、sh-RNASEH1-AS1、sh-NC、sh-METTL、si-NC、si-BUD13、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2、sh-METTL+pc-NC、sh-METTL+pc-ASEH1-AS1分别转染SW480细胞，用qPCR法检测后SW480细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2的表达，细胞克隆形成实验检测转染后各组SW480细胞的增殖能力，FCM术检测转染后各组SW480细胞的凋亡情况，细胞划痕实验检测转染后各组SW480细胞的迁移能力，WB法检测转染后各组SW480细胞中ANXA2、β-catenin、p-β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白表达，RNA免疫沉淀（RIP）法检测RNASEH1-AS1与BUD1、BUD1与ANXA2的靶向关系。结果：数据库CRC数据分析和中国人CRC组织和癌旁组织的qPCR法检测结果均显示，与癌旁组织相比CRC组织中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β均呈明显高表达（均P<0.01），且RNASEH1-AS1表达与METTL3（r=0.698，P<0.01）、BUD13（r=0.784，P<0.01）的表达呈正相关。在结直肠癌各细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2 mRNA均呈高表达（均P<0.05）；敲减RNASEH1-AS1或METTL3后SW480细胞中RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2表达显著降低（均P<0.05），而过表达RNASEH1-AS1后上述分子表达明显上调（均P<0.05）；敲减RNASEH1-AS1或METTL3可抑制SW480的增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白的表达，促进其凋亡（均P<0.05），而过表达RNASEH1-AS1则可促进SW480增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白的表达和抑制其凋亡（均P<0.05）；RNASEH1-AS1通过招募BUD13靶向促进ANXA2的表达（均P<0.05）；过表达ANXA2可部分逆转敲减RNASEH1-AS1对SW480细胞的影响（均P<0.05）。结论：METTL3修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin轴调控SW480细胞的恶性生物学行为。